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Gen - Wikipedia, la enciclopedia libre

Compatible con los niveles de mRNA, un nivel alto de la proteína PDE10A fue demostrado en el cuerpo estriado caudado y putamennucleus accumbensy tubérculo olfativo. La proteína Secuencia de genes impot fue observada en los cuerpos de células neuronales y en todas las partes del neurópilo. Fue identificada papaverina analizandola in vitro como un inhibidor selectivo de PDE10A.

Impotence Research 8 : Secuencia de genes impot generadas fosfodiesterasas de clones recombinantes de longitud completa transfectados en células SF9 como se describe antes Fisher et al. Las enzimas fueron purificadas por FPLC a partir de la fracción soluble de los lisados de células como se describe en Boolell et al.

Los ensayos fueron llevados a cabo usando una cantidad fija de enzima de PDE10A en presencia de concentraciones de inhibidor variables.

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Las reacciones fueron iniciadas con la adición de enzima. Las placas fueron reselladas y agitadas durante 20 minutos; después se permitió a las perlas sedimentarse durante 30 minutos en la oscuridad y luego fueron contadas en un lector de placas TopCount Packard, Meriden, Conn. Los cultivos del cuerpo estriado secuencia de genes impot prepararon como se describe antes Ventimiglia et al.

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El ARN fue preparado a secuencia de genes impot de un cultivo primario de neuronas espinosas medias del estriado de rata por centrifugación a La concentración de ARN fue determinada por espectrofotometría. Este fragmento entonces fue clonado después en pGEM3Zf. Los resultados de este ensayo confirmaron que el mRNA de PDE10A estaba presente en un nivel alto en el cultivo primario de neuronas espinosas medias del estriado.

El primero ciclo de la PCR fue llevado a cabo usando el iniciador específico del gen 3' anidado Tabla 3 y el iniciador adaptador de 5' el iniciador "Abridged Anchor Primer" AAP del kit. Todas las secuencias fueron alineadas para producir una secuencia acorde al extremo 5' de PDE10A de rata.

El primer ciclo de la PCR fue llevado a cabo usando el iniciador 5' específico del gen Tabla 3 y el secuencia de genes impot AP del kit. Las condiciones de ciclación fueron como las descritas anteriormente.

Estas bandas fueron aisladas y subclonadas y las colonias fueron rastreadas como anteriormente. Los clones secuencia de genes impot fueron identificados a partir de un producto de la PCR.

Las secuencias de seis de estos clones fueron alineadas para producir una secuencia acorde con el extremo 3' de PDE10A de rata. El iniciador 5' y el iniciador 3' Tabla 3 fueron diseñados a partir de la información de la secuencia 5' y 3' de rata generada anteriormente y modificada genéticamente para incluir los sitios de restricción SalI flanqueantes para facilitar la clonación.

Las reacciones secuencia de genes impot la PCR separadas fueron llevadas a cabo para cada una de las tres plantillas de cDNA de la primera cadena.

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Una banda de aproximadamente 2,3 kb de cada reacción PCR fue aislada por gel usando un kit de extracción de gel Qiagen, Valencia, California y fue ligada en Blunt PCR Invitrogen y fue transformada como anteriormente.

Los clones correctos fueron identificados por PCR colonia utilizando los iniciadores específicos y de PDE10 de rata Tabla 3 y la digestión de restricción SalI. Fueron identificados y secuenciados dos clones libres secuencia de genes impot pNB y pNB Ensayos basados en células y secuencias para la fosfodiesterasa 10A.

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Campo de la invención La presente invención proporciona métodos para identificar a agentes que modulan la actividad de PDE10A y las secuencias de polinucleótido y polipéptido para PDE10A de rata. Antecedentes Las nucleótido cíclico fosfodiesterasas PDE secuencia de genes impot la hidrólisis de los segundos mensajeros cAMP 3'5'-monofosfato cíclico de adenosina y cGMP 3'5'-monofosfato cíclico de guanina y juegan un papel regulador clave en una amplia variedad de rutas de transducción de señal BeavoPhysiol.

Sumario de la invención La presente invención proporciona métodos para identificar a agentes que modulen selectivamente la actividad de PDE10A y las secuencias de secuencia de genes impot y polipéptido para PDE10A de rata.

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Descripción detallada La presente invención secuencia de genes impot un ensayo de rastreo de células que usa neuronas espinosas medias del estriado para identificar a agentes que inhiban la actividad de PDE10A a nivel celular.

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Cohen and Annie C. Chang 1 de mayo de Consultado el 17 de julio de Mol Syst Biol 9 1 : Adv Genet. Advances in Genetics 80 : Biol 57 : Nat Protoc 8 11 : Secuencia de genes impot Opinion in Chemical Biology. September Nature Genetics 36 9 : Mario R.

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Homología de secuencia - Wikipedia, la enciclopedia libre

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Homología de secuencia

Una de las principales implicaciones del conocimiento acumulado del genoma humano es la investigación de características genéticas y sus asociaciones a fenómenos hasta entonces no explicados. Esos polimorfismos son responsables por las diferencias secuencia de genes impot características individuales en cada ser humano en nuestra población.

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Recientemente fue disponibilizada la base de datos del International HapMap Project, que muestra los llamados "tagSNPs" SNPs que señalan la presencia de un conjunto específico de alelos en otros polimorfismos próximos. Polimorfismos situados muy próximos entre sí tienden a segregar en conjunto de los secuencia de genes impot a los hijos, formando haplotipos.

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Existe otro abordaje, talvez tan eficiente como los GWAS, para estudiar genes que participan de mecanismos fisiológicos ya conocidos 8. Ese abordaje genotipo-bioquímica-fenotipo final es de gran valor, pues polimorfismos genéticos pueden secuencia de genes impot alteración en la actividad o expresión de proteínas. De esa forma, tales polimorfismos pueden tener gran valor predictivo en la clínica médica.

Probablemente, lo ideal sería buscar la complementación de Secuencia de genes impot con estudios tradicionales, uniendo el gran alcance de los GWAS con las ventajas de tener el foco en hipótesis de gran interés. Relevancia del óxido nítrico para el aparato cardiovascular.

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El endotelio tiene un papel importante en la regulación de la homeostasis vascular y en la manutención del tono vascular, estando envuelto con vías fisiológicas importantes en el control de la resistencia arterial al flujo sanguíneo. Entre diversos mediadores liberados por el endotelio, el óxido nítrico NO ejerce papel fundamental en la regulación del sistema cardiovascular. La nNOS es encontrada en una variedad de células que incluyen las neuronas y células endoteliales.

Tanto la nNOS como la eNOS son isoformas constitutivas y son calcio-dependientes, necesitando el aumento de los niveles de calcio intracelular y consecuente ligazón de éste con la calmodulina CaM para la activación de esas enzimas. La iNOS no es constitutiva y es expresada en procesos inflamatorios. La interacción de la eNOS con una proteína llamada caveolina resulta en la inactividad de la eNOS que se debe, en parte, a la ocupación del sitio secuencia de genes impot ligazón de la calmodulina Diversos secuencia de genes impot han sugerido que el desequilibrio en la biodisponibilidad del NO ejerce papel significativo en la disfunción endotelial.

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Las especies reactivas del oxígeno ROScomo el anión superóxido, reaccionan con el NO resultando en la formación de secuencia de genes impot. El aumento en la producción de ROS lleva, por lo tanto, a una reducción de la biodisponibilidad del NO 21pudiendo favorecer el surgimiento de diversas enfermedades cardiovasculares. Relevancia del óxido nítrico para las respuestas a las drogas secuencia de genes impot acción cardiovascular. Diversos grupos de drogas usadas en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares aumentan la biodisponibilidad de NO.

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secuencia de genes impot Paralelamente, ocurre un aumento de las concentraciones de cininas cuyo efecto predominante es opuesto a la AngIIy eso contribuye a los efectos cardiovasculares de esas Dietas rapidas Los iECA parecen también estimular la expresión y actividad de la eNOS 27,28probablemente envolviendo la ligazón de las cininas a sus receptores Esos efectos son inhibidos por el tratamiento concomitante con HOE, un antagonista del receptor B 2 de cinina 27, Los bloqueadores de canales de calcio BCC inhiben la entrada de calcio en las células musculares lisas, y de esa forma llevan a una menor contractibilidad y débito cardíaco.

Existen evidencias de secuencia de genes impot esa clase también aumenta la biodisponibilidad del NO 23, Estudios clínicos evidenciaron significativa mejora de la vasodilatación endotelio-dependiente en pacientes hipertensos e hipercolesterolémicos tratados con BCC, mostrando reversión de la disfunción endotelial Probablemente el aumento del NO es consecuencia del aumento de la actividad y expresión de la eNOS asociado a esas drogas Algunos de los efectos pleiotrópicos observados parecen estar asociados al aumento de la producción endógena de NO 37,38posiblemente atribuidos al aumento expresión y actividad de la eNOS 39, En el caso de la hipertensión pulmonar eso llevaría a una secuencia de genes impot de la presión, y en la disfunción eréctil facilitaría el entumecimiento del pene a consecuencia del estímulo neurogénico Polimorfismos genéticos de la eNOS.

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El gen de la eNOS ubicado en la región 7qq36 contiene 26 exones, 25 intrones y aproximadamente 21 a 22 Kb 45, Varios de esos polimorfismos han sido asociados a enfermedades cardiovasculares, tales como hipertensión, preeclampsia, entre otras Los estudios de funcionalidad y de asociación de ese polimorfismo con eventos cardiovasculares han demostrado resultados conflictivos 47,53, Un tercer polimorfismo, un SNP ubicado en el exón 7 del gen de la eNOS ha sido asociado a riesgo cardiovascular 47, Evidencias apuntan a menores formaciones de NO en secuencia de genes impot portadores del alelo Asp, llevando a posibles alteraciones funcionales 58, Células secuencia de genes impot portadoras de ese alelo parecen producir menos NO, por una disminución en la disponibilidad de la eNOS en la caveola de esas células 60 fig.

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Estudios han mostrado relaciones entre polimorfismos del gen de la eNOS secuencia de genes impot respuestas diferenciadas a diversas clases de drogas utilizadas en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares. Evidencias recientes sugieren una modulación de los efectos de las estatinas por polimorfismos genéticos de la eNOS.

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Eso se debe, probablemente, a la mayor actividad transcripcional, aumento de la estabilidad del mRNA y disminución de la expresión de RPA1 Confirmando secuencia de genes impot hallazgos en cultivos de células endoteliales, un estudio clínico mostró efectos similares con la atorvastatina En ese estudio, se Adelgazar 10 kilos que el tratamiento con estatina aumentó la biodisponibilidad del NO y disminuyó el estrés oxidativo apenas en individuos homocigotos CC para el polimorfismo T C Nótese que fueron estudiados individuos sanos, haciendo que la droga tuviese mucho menos posibilidad de producir efectos significativos Posteriormente, fue observado que los efectos antiinflamatorios de la atorvastatina son modulados por el mismo polimorfismo, llevando a una reducción significativa en las concentraciones de citocinas inflamatorias CD40L, VCAM-1, P-selectina y MMP-9 en individuos con genotipo CC, pero no secuencia de genes impot los individuos TT De cualquier forma, los resultados de los estudios con atorvastatina mencionados deben ser interpretados con cautela, pues no fueron evaluados eventos clínicamente relevantes y la simple medida de marcadores bioquímicos puede no ser efectiva para indicar nuevos secuencia de genes impot de drogas.

Estudios clínicos enfocando eventos clínicamente relevantes deberían ser hechos para comprobar los resultados discutidos antes.

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Aunque la mayoría de los estudios farmacogenéticos de las estatinas relacionados a eNOS se centre en el polimorfismo en la región promotora de la eNOS, el polimorfimo en el intrón 4 también parece modular la respuesta a las estatinas. Kunnas et al. Los individuos portadores del alelo "a" mostraron significativa mejora de la vasodilatación cuando fueron comparados a los individuos con genotipo secuencia de genes impot, posiblemente por el mayor aumento de la producción endotelial de NO en los individuos con el alelo raro Otro polimorfismo en el secuencia de genes impot de la eNOS, GluAsp en el exón 7, parece modular los efectos del estradiol en la función plaquetaria.

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Adicionalmente, el efecto del hormona en la función plaquetaria no fue afectado por los polimorfismos en la región promotora e intrón 4 Fue demostrado que el polimorfismo GluAsp en el gen de la eNOS es capaz de modular la respuesta a la HCTZ, de manera secuencia de genes impot individuos homocigotos para el alelo Glu tienen una reducción en los niveles de presión arterial significativamente mayor que individuos poseedores del alelo Asp Otras clases de secuencia de genes impot de gran importancia son los betabloqueantes y los inhibidores del receptor AT-1 de angiotensina 2.

El alelo G del polimorfismo A G fue asociado con una mayor disminución de la presión arterial consecuencia del efecto del betabloqueante atenolol en relación al alelo A El alelo A del polimorfismo G A fue asociado a una mejor respuesta tanto ante el betabloqueante como ante el irbersartan La presencia secuencia de genes impot los alelos G y del alelo A podría incurrir en un beneficio mayor a los portadores de esos alelos tratados con esos antihipertensivos.

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La hipertensión normalmente es tratada con la adición de diferentes clases de antihipertensivos hasta la reducción de la presión arterial a los niveles preconizados secuencia de genes impot En ese contexto, fue demostrada una tendencia no significativa de asociación entre el alelo Asp GluAsp e hipertensión resistente Estudios posteriores analizando haplotipos de la eNOS no confirmaron ninguna asociación con la resistencia a la terapia antihipertensiva Como fue comentado anteriormente, la disponibilidad de NO secuencia de genes impot un factor determinante para la actividad de los IPDE-5 A pesar de eso, la mayoría de los estudios aun se enfoca en secuencia de genes impot bases genéticas de enfermedades complejas, sin gran atención a las respuestas farmacológicas.

En relación a los sistemas de producción del óxido nítrico, importantes pasos iniciales fueron dados, y hoy existen fuertes indicios de que estatinas y estradiol de hecho pueden sufrir modulación por el background genético del gen de la eNOS en sus funciones farmacológicas. La farmacogenética tiene un gran espacio en ese escenario hipotético.

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La idea, llevada a un extremo utópico, seria identificar los polimorfismos genéticos importantes en el nacimiento, de modo de escoger a secuencia de genes impot todos los posibles futuros tratamientos del individuo, adecuando las dosis al perfil metabólico predicho por su DNA.

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